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雪對人有利也有害處,在三四月份的仲春季節,如突然因寒潮侵襲而下了大雪。就會造成凍寒。所以農諺說:“臘雪是寶,春雪不好。”
雪對人體健康的作用
《醫藥養生保健報》 冬季,大雪紛飛,蒼茫無際。人們在觀賞玉樹瓊花之時,往往忽視了雪的作用。雪對人體健康有很多好處。《本草綱目》早有記載,雪水能解毒,治瘟疫。民間有用雪水治療火燙傷、凍傷的單方。
經常用雪水洗澡,不僅能增強皮膚與身體的抵抗力,減小疾病,而且能促進血液循環,增強體質。如果長期飲用潔凈的雪水,可益壽延年。這是那些深山老林中長壽老人長壽的”秘訣”之一。
雪為什么有如此奇特的功能呢?因為雪水中所含的重水比普通水中重水的數量要少1/4。重水能嚴重地抑制生物的生命過程。有人作過試驗,魚類在含重水30-50%的水中很快就會死亡。雨雪形成最基本的條件是大氣中要有“凝結核”存在,而大氣中的塵埃、煤粒、礦物質等固體雜質則是最理想的凝結核。如果空氣中水汽、溫度等氣象要素達到一定條件時,水汽就會在這些凝結核周圍凝結成雪花。所以,雪花能大量清洗空氣中的污染物質。故每當一次大雪過后空氣就顯得格外清新。
據測定,一般新雪的密度每立方厘米為0.05-0.10克。所以,地面積雪對音波的反射率極低,能吸收大量音波,能為減少噪音作出貢獻。
雪的保溫作用
積雪,好象一條奇妙的地毯,鋪蓋在大地上,使地面溫度不致因冬季的嚴寒而降得太低。積雪的這種保溫作用,是和它本身的特性分不開的。
我們都知道,冬天穿棉襖很暖和,穿棉襖為什么暖和呢?這是因為棉花的孔隙度很高,棉花孔隙里充填著許多空氣,空氣的導熱性能很差,這層空氣阻止了人體的熱量向外擴散。覆蓋在地球胸膛上的積雪很象棉花,雪花之間的孔隙度很高,就是鉆進積雪孔隙里的這層空氣,保護了地面溫度不會降得很低。當然,積雪的保溫功能是隨著它的密度而隨時在變化著的。這很象穿著新棉襖特別暖和,舊棉襖就不太暖和的情況一樣。新雪的密度低,貯藏在里面的空氣就多,保溫作用就顯得特別強。老雪呢,象舊棉襖似的,密度高,貯藏在里面的空氣少,保溫作用就弱了。
為什么物體里貯藏的空氣越多,保溫效果越強呢?
這是因為空氣是不良導體的緣故。我們知道,任何一個物體,它本身都能通過熱量,這種能夠通過熱量的性能,稱做物體的導熱性。在自然界常見的幾種物質中,空氣的導熱性最差。所以物體里容納的空氣越多,它的導熱性就越差。由于積雪里所能容納的空氣量變化幅度較大,因此,積雪的導熱系數變化幅度也較大。一般剛下的新雪孔隙大,保溫效應最好,到春天融雪后期,積雪為水所浸漬,這時它的導熱系數就更接近于水了,積雪的保溫作用便趨于消失。
2、據測定,昆侖雪菊主要含有黃酮類、揮發油、多糖、皂苷、綠原酸等成分;其中含有17種氨基酸,8種為人體必需的氨基酸,占氨基酸總量的40.3%,游離氨基酸總量達到10.81%。現代藥理研究證實,昆侖雪菊具有降血脂、降血壓、抗衰老、抗癌、抗炎、抗病毒、降低血糖和改善微循環的作用。
3、昆侖雪菊藥性寒涼,容易傷人脾胃,不能長期飲用,否則可引起胃部不適、胃痛、腹瀉、消化不良等癥狀。身體虛寒、胃腸功能不太好、低血壓、低血糖的人不適宜飲用;另外,冬天比較怕冷、手腳冰涼、小便清長,容易拉肚子的人,喝昆侖雪菊會損傷正氣,越喝則陽虛癥狀越嚴重。
4、血壓偏低的人不宜飲用,因為雪菊本身就有降血壓的作用,由于昆侖雪菊自身有藥用功效,其中的有些成分可能會與其他藥物產生反應,給身體帶來不必要的傷害,
【摘要】 目的研究積雪草苷對小鼠膿毒癥致急性肝損傷的保護作用,并初步探討其作用機制。方法建立盲腸結扎穿孔(CLP)誘導的小鼠膿毒癥致急性肝損傷模型,隨后用不同劑量的積雪草苷(15,45 mg/kg)干預,24 h后檢測血清丙氨酸氨基轉移酶 (alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶 (aspartate aminotransferase,AST)、腫瘤壞死因子-alpha (tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的含量; 免疫印跡法檢測肝組織中環氧合酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)的表達,并取部分肝組織進行組織病理學分析。結果積雪草苷劑量依賴性地減少膿毒癥誘導的血清中ALT、AST及TNF-α的升高,抑制肝組織中COX-2蛋白的表達,病理切片顯示積雪草苷組肝組織受損程度較模型組為輕。結論積雪草苷對CLP誘導的肝損傷具有一定的保護作用,其機制可能與抑制炎癥介質COX-2和TNF-α有關。
【關鍵詞】 積雪草苷; 膿毒癥; 盲腸結扎穿孔; 急性肝損傷; 環氧合酶-2
Abstract:ObjectiveTo study the protective effect and mechanism of asiaticoside on sepsis-induced acute liver injury in mice.MethodsSepsis-induced acute liver injury was induced by cecal ligation and puncture (CLP) in Kun Ming mice. Subsequently,different doses of asiaticoside (15 mg/kg,45 mg/kg) were used to intervene. 24h later,serum alanine aminotransferase (ALT),aspartate aminotransferase (AST) and tumor necrosis factor alpha (TNF-α)levels were measured,western blotting was used to determine cyclooxygenase-2(COX-2) expression in liver tissues and histopathology examination was performed by hematoxylin-eosin(HE) staning method.ResultsThe results showed that asiaticoside decreased serum ALT,AST and TNF-α levels,inhibited COX-2 expression in liver tissues,and histopathological changes of liver were improved by asiaticoside as compared to model group,and these effects were dose-dependent.ConclusionAsiaticoside has protective effect against sepsis-induced acute liver injury,and the mechanism is probably associated with the inhibition of TNF-α in serum and COX-2 expression in liver tissues.
Key words:Asiaticoside;Sepsis;Cecal ligation and puncture;Acute liver injury;Cyclooxygenase-2
膿毒癥及隨后的多臟器功能障礙綜合征(multi organ dysfunction syndrome MODS)已成為當今外科重癥監護病房中的首要死亡原因之一。據統計,全球每年有600 000例膿毒癥患者死亡[1],其死亡率高達50%。在膿毒癥發展過程中,肝臟是最易受損的器官之一。膿毒癥患者出現肝功能異常是其病情加重的標志。因而,尋求膿毒癥誘發的急性肝損傷的有效防治途徑成為危重病醫學亟待解決的問題。積雪草苷(Asiaticoside)為積雪草提取物三萜皂苷的主要成分之一[2,3],具有促進傷口愈合、抗潰瘍、抗炎等作用[4],臨床上用于治療慢性炎癥、皮膚病等[5]。本實驗針對積雪草苷對炎癥有效的特點,利用經典的小鼠盲腸結扎穿孔(Cecal ligation and puncture,CLP) 模型,研究積雪草苷對膿毒癥誘發的急性肝損傷是否具有治療作用并初步探討其作用機制。
1 材料
1.1 藥品與試劑積雪草苷(純度>95%,無色結晶,分子式:C48H78O19,相對分子量:959.15),由廣西昌洲天然植物開發有限公司提供,批號20060205;丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)測定試劑盒為南京建成生物工程研究所產品;小鼠TNF-α ELASA檢測試劑盒(德國Bender公司);BCA蛋白定量試劑盒(pierce公司);誘導型環氧合酶2(COX-2)抗體(Abcam公司)。
1.2 動物及分組成年昆明小鼠,體質量18~22 g,40只健康小鼠,各半[重慶醫科大學實驗動物中心提供,實驗動物生產許可證號SCXK(渝)20070001,使用許可證號SYXK(渝)20070001]。隨機分為4組:假手術組,模型組,積雪草苷小、大劑量干預組(15,45 mg/kg),每組10只。
2 方法
2.1 CLP動物模型的制作[6,7] 行CLP手術之前1 h,假手術組與模型組給予等體積生理鹽水,積雪草苷組腹腔注射對應劑量藥物。造模方法:動物在實驗前1 d禁食,0.3%的戊巴比妥鈉(30 mg/kg)腹腔注射麻醉,于小鼠腹正中線做一長約1 cm切口,找出盲腸并結扎其根部,保留血供,選用8號針頭穿刺已結扎盲腸1次,擠出腸內容物少許,1-0絲線關閉腹腔。生理鹽水復蘇(0.5 ml/10 g背部皮下注射)。按照相同的方法處理假手術組的動物,但盲腸不穿孔不結扎,術后禁食不禁水。
2.2 小鼠生存率的觀察CLP后24 h每6 h觀察記錄小鼠生存情況。
2.3 血清ALT和AST的檢測24 h后存活小鼠眼球取血,離心(3 000 r/min,10 min)取血清,按試劑盒說明書檢測血清中ALT和AST的活性。
2.4 血清TNF-α的檢測24 h后存活小鼠眼球取血,離心(3 000 r/min,10 min)取血清,按ELASA試劑盒操作,檢測血清中TNF-α的水平。
2.5 肝組織COX-2蛋白表達的免疫印跡法檢測24 h后處死小鼠,稱取100 mg肝組織,研磨后裂解細胞提取蛋白,BCA法蛋白定量。取40 μg蛋白上樣,SDS-PAGE電泳后,轉移至硝酸纖維素膜上,室溫下封閉1 h;加入一抗4℃冰箱封閉過夜;次日脫洗3次,二抗孵育1 h,再脫洗5次后,ECL顯色,X線片曝光,洗片。
2.6 病理檢查24 h后處死小鼠取肝臟左葉10%甲醛固定,脫水、脫鈣后石蠟包埋切片,HE染色。
2.7 統計學處理各組數據以 ±s表示,運用SPSS軟件對兩樣本均數t檢驗,P
3 結果
3.1 小鼠死亡率觀察結果見圖1。與假手術組比較,模型組中小鼠死亡率明顯升高;而積雪草苷組可明顯降低膿毒癥致急性肝損傷引起的小鼠死亡率,且具有一定的劑量依賴性 (P
3.2 血清ALT、AST測定結果見圖2。模型組與假手術組比較,血清ALT、AST活性明顯升高;而積雪草苷組可明顯降低膿毒癥致急性肝損傷引起的ALT、AST活性升高,且具有一定的劑量依賴性 (P
3.3 血清TNF-α含量測定結果見圖3。模型組血清TNF-α含量明顯高于假手術組;而積雪草苷組可明顯降低膿毒癥致急性肝損傷引起的TNF-α含量升高,且具有一定的劑量依賴性(P
3.4 積雪草苷對肝組織中COX-2蛋白表達的影響結果見圖4。模型組COX-2蛋白表達明顯高于假手術組;而積雪草苷可顯著降低急性肝損傷中COX-2蛋白的過量表達,并呈現出一定的劑量依賴關系。
3.5 病理學檢查結果結果見圖5。假手術組小鼠光鏡下肝小葉結構完整,肝細胞索排列整齊,以中央靜脈為中心呈放射狀排列,肝細胞核位于肝細胞中央,圓而邊界清。模型組小鼠肝小葉失去正常結構,肝細胞索解離,肝細胞普遍變性壞死,腫脹,并可見大量炎性細胞浸潤。積雪草苷組肝細胞仍有部分變性壞死,且有少量中性粒細胞浸潤,但病變程度遠比模型組輕。與模型組比較,**P
c-積雪草苷 15 mg·kg-1d-積雪草苷 45 mg·kg-1圖4 積雪草苷對CLP致急性肝損傷小鼠肝COX-2表達影響a-假手術組 b-模型組 c-積雪草苷15 mg·kg-1 d-積雪草苷 45 mg·kg-1圖5 積雪草苷對CLP致急性肝損傷小鼠肝組織影響
4 討論
盲腸結扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)導致的膿毒癥是一個經典模型,被廣泛用于模擬臨床膿毒癥。盲腸穿孔導致駐扎在腸道的微生物滲出,造成腹部局部感染、細菌性腹膜炎,隨后引起全身性炎癥反應(systemic inflammatory response syndrome,SIRS),MODS 甚至死亡[8]。膿毒癥時,肝臟損傷發生較早,最終可發展為肝衰竭。因此CLP模型是篩選和研究治療或預防膿毒癥時肝損傷藥物的理想模型。CLP誘導的膿毒癥引起急性肝損傷,肝細胞細胞膜因脂質過氧化反應而功能受損、結構破壞,細胞內的ALT、AST釋放入血,使血清中ALT與AST活性升高。本實驗顯示積雪草苷各劑量組明顯抑制膿毒癥引起的ALT、AST活性升高,減輕了肝損傷的程度,同時顯著減輕了肝臟組織病理學變化,明顯降低了CLP誘導的膿毒癥致急性肝損傷引起的小鼠死亡率,并表現出一定的劑量依賴關系,對CLP誘導的膿毒癥致急性肝損傷有一定的保護作用。
在膿毒癥狀態下,細菌及其毒素等產物刺激機體產生過量的細胞因子,導致機體正常調控機制失靈,形成炎癥級聯反應。在這些細胞因子中,TNF-α發揮著重要的作用,研究顯示阻斷TNF-α的作用或減少TNF-α的釋放都能降低CLP術后小鼠的死亡率[9]。TNF-α具有潛在的細胞毒性并能引起炎癥級聯反應,其在肝損傷的病理機制中起著重要作用[10]。在CLP誘導的膿毒癥致急性肝損傷中,炎癥反應被激活,TNF-α大量生成,導致肝細胞進一步壞死、凋亡,加重了肝損傷程度。本實驗表明積雪草苷顯著降低了小鼠血清中的TNF-α水平。
環氧化酶-2(COX-2)是催化花生四烯酸生成前列腺素類物質的限速酶,在正常生理狀態下,大多數組織中表達甚微,但細胞因子、生長因子、內毒素、炎癥等可誘導其表達。在膿毒癥所致急性肝損傷中,過量表達的COX-2及其PGs產物可參與炎癥進程,加重肝損傷程度。研究顯示COX-2抑制劑可減輕小鼠CLP術后膿毒癥引起的急性肝損傷[11]。本實驗中積雪草苷能明顯抑制肝組織中COX-2的表達,這也可能是其肝保護作用的主要機制之一。
綜上所述,積雪草苷對CLP誘導的膿毒癥致急性肝損傷小鼠有明顯的保護作用,該作用可能與減少TNF-α的釋放及COX-2的表達有關,其具體機制還需進一步探討。
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雪花是一種美麗的結晶體,它在飄落過程中成團攀聯在一起,就形成雪片。單個雪花的大小通常在0.05——4.6毫米之間。雪花很輕,單個重量只有0.2——0.5克。無論雪花怎樣輕小,怎樣奇妙萬千,它的結晶體都是有規律的六角形,所以古人有“草木之花多五出,度雪花六出”的說法。雪花多么美麗而輕盈呀!我越來越喜歡雪花了,如果能夠再次目睹大地白雪皚皚,綠樹披銀裝,真是一件賞心悅目的趣事。
“瑞雪兆豐年”是我國廣為流傳的農諺。在北方,一層厚厚而疏松的積雪,像給小麥蓋了一床御寒的棉被。雪中所寒的氮素,易被農作物吸收利用。雪水溫度低,能凍死地表層越冬的害蟲,也給農業生產帶來好處。所以又有一句農諺“冬天麥蓋三層被,來年枕著饅頭睡。”
雪的作用很廣,但雪對人類有很大的好處。首先是有利于農作物的生長發育。因雪的導熱本領很差,土壤表面蓋上一層雪被,可以減少土壤熱量的外傳,阻擋雪面上寒氣的侵入,所以,受雪保護的莊稼可安全越冬。積雪還能為農作物儲蓄水分。此外,雪還能增強土壤肥力。據測定,每1升雪水里,約含氮化物7.5克。雪水滲入土壤,就等于施了一次氮肥。用雪水喂養家畜家禽、灌溉莊稼都可收到明顯的效益。
雪對人有利也有害處,在三四月份的仲春季節,如突然因寒潮侵襲而下了大雪。就會造成凍寒。所以農諺說:“臘雪是寶,春雪不好。”
朋友們,聽了我的介紹,你是否對雪更加喜歡和了解了呢?
[關鍵詞] 六月雪水提取物;血漿纖維蛋白原;凝血酶原時間國際標準比值;活化部分凝血活酶時間
[中圖分類號] R965.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721(2014)10(b)-0012-03
六月雪為民間常用草藥,一直用于治療病毒性肝炎及肝硬化,為茜草科六月雪屬植物六月雪[Serissa serissoides (DC.)Druce(SSD)][1]。研究顯示,六月雪含有多種丙烯苯并呋喃類化合物以及β-谷甾醇和豆甾醇[2]。有研究顯示,六月雪對實驗性胃黏膜損傷具有明顯的保護、抑菌及提高免疫功能等作用[3-7],復方六月雪還具有體外抗HBV作用和治療腎臟疾病的功能[8-9]。課題組已經報道了六月雪水提取物的促凝血作用及機制[10],現繼續報道關于其促凝血作用及機制的研究。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 六月雪水提取物的制備 取干燥六月雪0.3 kg,用適量雙蒸水(過液面2 cm)浸泡24 h,次日煮沸2次,30 min/次,過濾,合并濾液并濃縮至600 ml左右,冷卻后加3倍量95%的乙醇,混勻后放冰箱靜置過夜,次日減壓過濾,濾液繼續濃縮至300 ml,使藥液為相當于生藥1.0 g/ml。調整pH為7.0,置冰箱中備用。
1.1.2 試驗動物 健康成年SD大鼠(購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司)45只,體重300~400 g,雌雄各半,隨機分為3組,每組5只。
1.1.3 藥品與試劑 水合氯醛(青島高昌益網絡科技有限公司德源化工,批號:20110407);枸櫞酸鈉(1:9)真空采血管(江西富爾康實業集團有限公司,批號:20110903)。
1.1.4 儀器 凝血因子分析儀(美國海倫娜)、KDC-2046低速冷凍離心機、日本日立7600-020+1SE全自動生化分析儀,LG-PABER血小板聚集器凝血因子分析儀等。
1.2 方法
1.2.1 分組及給藥 大鼠隨機分為生理鹽水對照組、低劑量六月雪水提取物組(1.5 g/kg)、高劑量六月雪水提取物組(3.0 g/kg)。高、低劑量組每天以相應量的藥物灌胃,鹽水對照組給予等量生理鹽水灌胃,1次/d,連續5 d。
1.2.2 方法[11-12] 末次給藥后1 h,從大鼠心臟取血,分離血漿,置離心管中,56℃加熱10 min,然后3000 r/min離心10 min,參照LG-PABER凝血因子分析儀操作規程進行測定,記錄血漿纖維蛋白原水平。
從大鼠心臟取血,置入含3.8%枸櫞酸鈉的離心管中,混勻后以3000 r/min的速度離心10 min,離心后用微量進樣器分別取所需血漿量,參照LG-PABER凝血因子分析儀操作規程進行測定,記錄活化部分凝血活酶時間。
取待測血漿0.1 ml,37℃水浴孵育3 min,加0.2 ml凝血活酶,混勻,用秒表記錄凝固時間,即為PT值(s)。每個樣品重復實驗5次,取其平均值。然后按公式INR=(PTtest/PTnormal)ISI(其中ISI為國際敏感指數)計算凝血酶原時間國際標準比值。
1.3 統計學處理
應用SPSS 14.0統計軟件包對數據進行分析,計量資料以x±s表示,采用t檢驗,以P
2 結果
2.1 六月雪水提取物對血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時間的影響
1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物均能顯著升高大鼠血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時間,且有一定的劑量依賴性(表1)。
表1 六月雪水提取物對血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時間的影響(x±s,n=5)
與生理鹽水組比較,*P
2.2 六月雪水提取物對凝血酶原時間國際標準比值的影響
1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物能顯著降低凝血酶原時間國際標準比值,且有一定的劑量依賴性(圖1)。
圖1 六月雪水提取物對凝血酶原時間國際標準比值的影響
與生理鹽水組比較,*P
3 討論
凝血過程可由“內源途徑”和“外源途徑”引發,是一個多因子參與的復雜過程,同時凝血時間和凝血酶原時間可分別反映”內源途徑”和”外源途徑”的功能狀況,纖維蛋白降解也是體內重要的抗凝血過程之一。
六月雪為茜草科六月雪屬植物,是民間常用草藥。課題組已對六月雪水提取物進行了促凝血作用及機制的研究,前期研究顯示,六月雪水提取物能明顯縮短體外凝血時間、血漿凝血酶時間,還可以減小凝血酶原時間,延長優球蛋白溶解時間[10]。本實驗在前期研究的基礎上繼續深入研究其對血液凝固的影響,結果顯示六月雪水提取物具有明顯的促進血液凝固作用。
本研究結果顯示,六月雪水提取物能明顯升高血漿纖維蛋白原,顯著降低活化部分凝血活酶時間和凝血酶原時間國際標準比值,提示六月雪水提取物既能影響內源性凝血途徑,又能作用于外源性凝血途徑,其作用機制可能與上述因素有關。六月雪促凝血作用的有效成分還有待進一步的研究。
致謝:感謝贛南醫學院曾靖教授對論文的指導。
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