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對標學習計劃范文第1篇

關鍵詞： 化學學習目標設計 新手型教師 反思 對策

優質的化學課堂教學活動的完成需要有效的教學設計為基本前提，課時化學學習目標的設計是課堂教學設計的第一步。新手型教師，受傳統的教學環境和思想的影響，在入職初期對學習目標的認知和設計上存在一些誤區，這些誤區在一定程度上影響了課堂教學，也制約了新手型教師的專業化發展。在本文中，筆者將對自身在學習目標設計上的問題進行深入反思并提出對策。

一、課時學習目標設計反思

1.學習目標認知誤區。

（1）學習目標無用。在入職初期，筆者以傳統教學理念為指導，認為教師是課堂教學活動的主體，課堂是劇場，講臺是教師表演的舞臺，而學生是觀眾。至于教師怎么完成一節課是教師的主觀行為，是以教科書內容為基本載體的直感發揮，不需要設計明確的學習目標。

（2）學習目標是形式。在常規化的教學過程中，學校會進行常規檢查，迫于形勢要求，筆者在教學設計時照抄優秀教案上的教學目標，直接代替學習目標。照抄來的學習目標形式上是按照新課程的目標要求的三個維度來設計的，但是對筆者實際的教學過程沒有任何的指導意義。

（3）學習目標是知識點的羅列。受教師為本的思想束縛，筆者曾一度認為所謂的學習目標就是教師規定學習內容，上課前教師通過對教科書上的內容稍作分析，找出教科書上的知識點，按照教科書上的知識點呈現順序依次講解，如果學生掌握了上述的知識點，就實現了學習目標。

（4）學習目標是課程目標。筆者在進行教學設計時，將化學課程目標代替學習目標。在《分子》的教學中，將義務教育化學課程標準中的內容標準直接拿來用。這樣的目標是抽象的、不具體的，對學生學習沒有指導意義。

2.學習目標設計誤區.

（1）過分注重知識體系。在當前的教育體制下，教育評價依據主要是學生的學業成績。筆者在進行教學活動時，考慮更多的是如何能夠提高學生的成績，尤其面對中考。在學習目標的設計中，過分關注教科書中具體知識內容的落實。

（2）忽視隱性目標，強調顯性目標。學生的發展不但包括基礎知識的學習、基本技能的鍛煉，而且包括過程的體會、方法的學習、情感的培養、態度的養成、價值觀的形成。前者是可以觀察的具體行為變化，后者是不可測量的心理變化。筆者在教學設計時，往往忽視后者，強調前者。

3.學習目標陳述誤區。

（1）行為主體顛倒。新課程理念提倡學生的主動學習。筆者在做學習目標陳述時，使用“讓學生知道溶解的條件”，“培養學生的科學探究能力”，“提高學生的安全意識”等語句。這樣描述教師的教學活動是錯誤的，而應該清楚地描述出目標達成的主體是學生。

（2）行為動詞選擇不恰當。九年義務教育化學課程標準要求，學習目標陳述應該具體。筆者傾向選擇“了解”、“解釋”、“理解”等模糊、籠統的行為動詞，這樣的行為動詞是無從檢測評價的。

（3）行為條件范圍不明確。行為條件主要說明學生在什么樣的具體情境中獲得學習體驗。筆者使用這樣的陳述語句“會查找出常見元素的符號”，這種描述沒有明確的范圍和條件。應該指出“會利用元素周期表查找常見元素的元素符號”。

二、課時學習目標設計的對策

1.建立對學習目標正確認知。

學習目標設計是教學設計的方向標。學習目標的設計從“知識與技能”、“過程與方法”、“情感態度與價值觀”三個維度來設計，是對“學生學什么”的具體化闡述，是提高學生化學科學素養的根本保證，是學生學習結果的有效評價依據。

課時學習目標的設計應該按照課程標準的要求，從三維目標形式，根據馬杰提出的ABCD行為目標陳述法進行陳述。

2.建立對學習目標設計的正確認知觀。

教師在設計學習目標時要進行如下的教學認知活動。

（1）研讀課程標準。研讀課程標準主要是研讀課程內容標準部分。內容標準太抽象、不直觀，不是學生應該掌握的，因此應該將內容標準進一步細化，表達成學生顯而易見的，通俗易懂的學習目標。

（2）進行教科書分析。首先，進行教科書內容的具體化分析，先研讀教科書內容，在教科書中逐一找到教材內容的具體化，即找要點內容，具體化的內容必須是學生要記住的，在教科書中通常以例子、實驗，以及“學完本課題你應該知道”的三種形式體現。

其次，進行教科書內容的進一步分析，從內容的知識性質和內容的回歸性兩個維度進行分析。化學知識有四種不同類型，學習方式是不同的。在內容的知識性質分析時，最主要確定知識類型，進而確定學生學習方式的產生方式，為行為動詞的選擇提供理論依據。內容的回歸性分析就是回歸到在分子和原子水平上研究物質，以及物質的變化這個基本主題上。

（3）學生已有知識或經驗分析。學生已有知識或經驗的分析是建立在對教科書內容的第二輪分析的基礎之上的。依據奧蘇貝爾提出的有意義學習原理。教師通過第二輪教科書分析、課后習題分析，以及練習冊習題分析，確定學生的已有知識和經驗。當教師清楚地了解學生的已有知識和經驗，可以設計出有意義的學習目標。

（4）學習目標設計。

①基本學習目標的設計建立在以教科書內容的分析為基礎，以課程標準的內容標準為指導依據，精心設計行為動詞。

②發展性學習目標的設計是建立在學生已有知識或經驗分析的基礎上的。

③進一步的發展性目標是對課程標準的挖掘，是基于理解科學本質的目標。

參考文獻：

對標學習計劃范文第2篇

關鍵字：幼兒園;小學化;對策中圖分類號：G612文獻標識碼：B文章編號：1672-1578（2014）16-0279-011.幼兒園教育"小學化"傾向的表現

1.1教學過程小學化。近幾年來，幼兒園教學采用了灌輸式教學方式，幼兒園學生吃不消該教學方法。例如：漢語學習過程中，教師選擇的授課程序為：出示字卡或者將其板書在黑板上，教師帶領幼兒進行認字，給幼兒講解組詞以及字義，進行造句訓練。同時，教師還會給幼兒書寫順序規范指導，幼兒在教師的指導下進行反復的書寫練習，這個教學過程和小學生漢子學習過程比較相似。幼兒通過自我觀察、自我體會從而獲得知識過程比較缺乏，而且幼兒教學中借助動手操作獲得知識的活動也相對較少。教師比較強化紀律，比較重視紀律性，幼兒自逐漸被剝奪。

1.2課程設置小學化。有些幼兒園已經開設了小學一年級課程，這些課程包含拼音、計算、漢字以及古詩等等。還有的幼兒園開始增設了英語、珠心算等教學課程。在課程設置上，將少部分的時間用于游戲、繪畫以及舞蹈。幼兒從小便處于忙碌的學習環境中，這容易導致幼兒天性丟失，容易使得幼兒出現學習疲勞。

1.3教育目標小學化。有些幼兒園不將過多的力度放置在幼兒身心健康規律研究上，而是強調培養幼兒教育，將其作為教學目標。導教功能難以發揮，卻過重的強調教學目的。幼兒和小學銜接比較強，很多的幼兒在學習中都開始被要求珠算、識字以及拼音等等，給幼兒布置過多的作業，會使得幼兒學習出現不良后果。

2.防止幼兒園教育小學化傾向的對策

2.1加強課程設置的生活性。幼兒園教學課程設置，應該根據幼兒身心發展情況確定，需要將幼兒心理需求作為課程布置出發點。選擇一些可以激發幼兒學習興趣，可以更好引導幼兒發現問題的內容。幼兒教育課程設置不僅需要充分考慮到知識內部結構組建，還應該考慮到知識之間的邏輯結構和順序。課程設置時，應該根據幼兒興趣、幼兒發展特點以及需求，選擇一些生活化比較強的課程內容，使得幼兒在情境中去學習，從而體驗到學習樂趣。幼兒園課程設置應該同現實生活相互結合，并且可以逐漸形成五類活動，這五類活動可以是語文活動、藝術活動、科學活動、健康活動以及社會活動。一些日常的生活方式都可以納入教學內容，例如：早操、睡眠、游戲以及種植物飼養種植等。因此，在進行課程設置時，應該具備幼兒園設置特色，應該不斷突破傳統的課程內容，將局限摒棄。遵循幼兒生活邏輯，滿足幼兒心理世界為基礎上開設課程，使得個性化設置更加符合需求。

2.2注重教學過程的體驗性、活動性、游戲性。幼兒教學應該實現"玩"中"學"，游戲是幼兒學習重要方式。因此，幼兒教學中應該更加注重于幼兒參與性教學，將體驗性、游行性以及活動性融合為一體。教師可以綜合使用游戲形式、小組談論形式以及操作形式進行多項教學。逐漸調動幼兒學習積極性，在活動過程中幼兒強烈的求知欲望被激發出來。在游戲中獲得樂趣，從而形成積極、樂觀學習心態。幼兒通過親身經歷學習，通過實際操作，對知識的理解和掌握會更加深刻。游戲是幼兒學習的最有效手段。陳鶴琴先生說過，"游戲是兒童的心理特征，游戲是兒童的工作，游戲是兒童的生命"。幼兒的各種能力是在游戲中獲得的，游戲可以使幼兒的創造能力、思維能力、語言表達能力、合作能力等得到全面的發展和提高。因此，教師在進行教學中，應該使用各種有趣的游戲活動進行教學，從而不斷提高幼兒身心健康。教師可以組織起多種活動，例如常見的數學發現活動、寫字活動以及電腦游戲活動等，這些活動能夠豐富教學內容，可以激發幼兒學習樂趣。這些活動滿足了幼兒對游戲的需求，還可以在游戲中體驗學習，該教學過程更好避免"小學化"傾向出現。孩子擁有基本的讀、寫、算能力，還可以在游戲中感受游戲樂趣，這是一種自由式學習方式，更好避免傾向化教學出現。

2.3重視幼兒行為規范訓練的自主性、快樂性。幼兒行為規范一般需要建立在自我管理基礎上，教師應該做好學生啟發工作，逐漸引導幼兒，使得幼兒有更好的約束力，在學習中逐漸養成良好學習行為。為了更好的培養幼兒擁有良好學習習慣，應該選擇愉快的教育方式，將教學融入活動中。在對幼兒進行規范性訓練過程中，應該基于正面去引導，進行反復的強化正確行為，可以給幼兒合適的鼓勵和表揚。教師應該明確這個度的把握，不能傷害的孩子自尊，也不能使得孩子出現高傲心理。教師本身可以起到良好的示范作用，讓孩子參與其中，逐漸引導幼兒進行學習。在該教學過程中，將幼兒主體地位展現出來。基于該教學理念開展教學，能夠取得良好教學效果，孩子在該學習過程中，獲得自我發展。

3.結束語

當前幼兒教學問題備受社會關注，在教學中出現小學化問題比較嚴重。因此，需要采取有效教學方法，避免小學化問題出現，這才更好的實現教學目的，才能讓幼兒基于歡樂的氛圍中，一邊游戲一邊學習。參考文獻：

[1]王廷廷."鐐銬下的孩子"--多重視角下的公辦幼兒園教育"小學化"傾向 [J].西北師范大學：學前教育學

[2]安惠敏，孫麗花.對幼兒園教育"小學化"傾向認識的現狀調查--以幼兒教師為調查對象[J].《中國科教創新導刊》 -2013年27期

[3]劉占蘭.我國幼兒園教育質量的現狀--與1992年幼兒園質量狀況比較[J].《學前教育研究》 PKU -2012年2期

對標學習計劃范文第3篇

【摘要】 目的 觀察光化學療法(PUVA)誘導人白血病細胞HL-60、K562、NB4凋亡時對Fas表達的影響。方法 人白血病細胞分別與不同濃度補骨脂素(PSO)、接受或不接受長波紫外線(UVA)照射后共同培養，電鏡下觀察細胞超微結構改變，熒光定量PCR技術檢測細胞Fas基因的表達，流式細胞儀(FCM)檢測細胞凋亡率和Fas蛋白的表達，采用多因素方差分析法進行統計學處理。結果 PUVA處理后的人白血病細胞超微結構出現明顯的凋亡形態學改變；PSO、UVA照射及PUVA可使細胞凋亡率增加，可上調白血病細胞Fas在基因、蛋白水平的表達，PUVA的作用顯著強于前兩者(P

【關鍵詞】 光化學療法；白血病；HL-60細胞；K562細胞；NB4細胞；細胞凋亡；Fas

Key words：PUVA therapy；leukemia；HL-60 cells；K562 cells；NB4 cells；apoptosis；Fas

補骨脂素(psoralen，PSO)具有光敏性質與抗腫瘤活性。本實驗以不同濃度加波長為360 nm，不同照射時間的長波紫外線(ultraviolet A，UVA)光照作用于人白血病細胞HL-60、K562、NB4，通過流式細胞儀檢測細胞在光化學療法(PUVA)后的凋亡情況；電鏡下觀察細胞超微結構改變；熒光定量PCR及流式細胞技術檢測Fas在基因、蛋白水平的表達情況，以探討PUVA法對人白血病細胞誘導凋亡的作用及部分作用途徑。

1 材料與方法

1.1 細胞株

人急性髓細胞白血病(FAB-M2)HL-60細胞、人紅白血病細胞K562由大連醫科大學惠贈；人急性髓細胞白血病(FAB- M3)NB4細胞為上海血液學研究所陳竺院士惠贈。

1.2 藥物及主要試劑

PSO由大連理工大學及本院共同從補骨脂中提取和制備。二甲基亞砜(DMSO)購自北京化工廠，RPMI1640培養液、胎牛血清為Gibco產品，小牛血清系杭州四季青生物材料工程公司產品，Trizol為美國GIBCOBRL產品，Fas基因表達試劑盒購自中山大學達安基因股份有限公司，鼠抗人Fas(CD95)單克隆抗體為美國CALTAG實驗室產品。

1.3 儀器和設備

流式細胞儀購自美國貝克曼庫爾特公司，GLY-10型光量子血液平衡治療儀由徐州華衛醫療設備公司研制，熒光定量PCR儀(DA7600型)購自中山大學達安基因股份有限公司。

1.4 細胞培養

HL-60、K562、NB4細胞分別常規培養于含10%小牛血清及10%胎牛血清的RPMI1640培養基(含硫酸慶大霉素0.025 U/mL)中，于37 ℃、5%CO2、飽和濕度培養箱中進行連續培養。

1.5 分組

依據紫外線照射時間將實驗組分為下列2組：長波紫外線照射0 min組；長波紫外線照射5 min組。

1.6 細胞超微結構觀察

收集濃度為5.0×105/mL，經PUVA處理的白血病細胞10 mL，用PBS清洗2次，轉入2.0 mL離心管，離心(2 000 r/min)3 min，棄上清，緩緩加入2.5%戊二醛2 mL，4 ℃冰箱靜置2 h以上。磷酸緩沖液沖洗，鋨酸固定，水洗、脫水，浸透、包埋，制定超薄切片，透射電鏡下觀察。

1.7 光化學療法24 h后白血病細胞的凋亡情況

取濃度為4.0×105/mL、處于對數生長期的白血病細胞株5 mL，分別加入0、5、10、20、40 μL的PSO，使其在反應體系中的終濃度分別為0、10、20、40、80 μg/mL，放入石英比色皿中，在GLY-10型光量子血液平衡治療儀(λ＝360 nm)上以1 J/m2輻射量邊照射邊震蕩，照射時間分別為0、5 min。處理后各實驗組細胞繼續培養24 h后，收集5.0×105/mL細胞，用PBS洗2次，棄上清，加入100 μL碘化丙啶(PI)染液，避光反應30 min，加入PBS 400 μL，上機檢測，并用Multicycle軟件分析得出相應的細胞凋亡百分率。

1.8 光化學療法24 h后白血病細胞Fas基因表達情況

①總RNA提取，采用Trizol一步法提取mRNA，按照試劑盒說明書操作。②cDNA合成，反應體系包括：5×反轉錄buffer 4 μL(含Mg2+＝4 mmol/L)，反轉錄酶(200 U/μL)1 μL，dNTPs (10 mmol/L)0.5 μL，上游引物0.4 μL，下游引物0.4 μL，DEPC水9.7 μL，RNA模板4 μL，總體積20 μL；反應條件：37 ℃ 1 h， 95 ℃ 3 min。③將cDNA進行PCR擴增，反應體系包括：5×定量PCR buffer 10 μL(含Mg2＋＝2 mmol/L)，Taq酶(3 U/μL)1 μL，Fas上游引物1.0 μL，下游引物1.0 μL，各自的熒光探針1.0 μL(注：上、下游引物，探針的終濃度均為10 pmol/L)，dNTP 1 μL，ddH2O 30 μL，cDNA模板5 μL，總體積50 μL；同時，將制備的定量模板按照2×108/mL、2×107/mL、2×106/mL、2×105/mL、2×104/mL梯度稀釋，加入不同反應管中，在DA7600型熒光PCR儀進行擴增；反應條件：93 ℃ 2 min，93 ℃ 1 min， 55 ℃ 1 min，共40個循環。④反應結束后用由計算機計算定量結果，再通過換算得出每微克總RNA中Fas的mRNA拷貝數。上、下游引物及探針序列：Forward Primer：5’-GGGCAT CTGGACCCTCCTA-3’；Reverse Primer：5’-GGCATTAACACTTTTGGA CGATAA-3’；Probe：5’-FAM-CTCTGGTTCTTACGTCTGTTGCTAG- TAMRA-3’。

1.9 光化學療法24 h后白血病細胞Fas蛋白表達情況

收集白血病細胞1×106個，PBS洗滌1次后棄上清液，加入FITC-Fas抗體10 μL，避光孵育20 min，加500 μL PBS上機檢測Fas蛋白表達，以FITC-IgG1做對照。

1.10 統計學方法

所有實驗結果均來自至少3組平行或3次重復實驗。各種計量資料以x±s表示，采用多因素方差分析；所有統計計算均用SPSS11.5統計軟件進行，P

轉貼于 　　2 結果

2.1 光化學療法后細胞超微結構的改變

白血病細胞HL-60、K562、NB4均出現細胞體積縮小，胞漿濃縮，胞核體積減小，可裂解成一個或數個致密體，可見核小體碎裂，核染色質聚集或邊集，部分染色質致密成斑塊狀或沿核膜收縮成新月體狀，整個細胞可裂解成大小不一凋亡小體。

2.2 光化學療法誘導白血病細胞凋亡的作用

(見表1～表3)表1 PUVA后24 h HL-60細胞凋亡率(略)注：與0 min組 0 μg/mL比較，*P

2.3 光化學療法24 h后白血病細胞Fas基因表達情況

(見表4～表6)表4 PUVA后24 h HL-60細胞Fas mRNA的表達(略)表5 PUVA后24 h K562細胞Fas mRNA的表達(略)表6 PUVA后24 h NB4細胞Fas mRNA的表達(略)

2.4 光化學療法24 h后白血病細胞Fas蛋白表達情況

(見表7～表9)表7 PUVA后24 h HL-60細胞Fas蛋白表達(略)表8 PUVA后24 h K562細胞Fas蛋白表達(略)表9 PUVA后24 h NB4細胞Fas蛋白表達(略)

3 討論

PSO的抗腫瘤、抗白血病作用，以及其具有的光敏活性已被人們所認識[1-5]。本院開展了PUVA體外凈化自體骨髓移植治療各類白血病的臨床研究，初步結果令人鼓舞。

本實驗采用紫外波長為360 nm的GLY-10型光量子血液平衡治療儀和/或補骨脂中提取的PSO對人白血病細胞HL-60、K562、NB4進行處理，結果從電鏡下的細胞超微結構改變和流式細胞儀檢測的細胞凋亡率兩個方面證實了PUVA對白血病細胞誘導凋亡的作用。

Fas/FasL系統在傳遞細胞凋亡信號中起著重要作用[6]。結果顯示HL-60、K562、NB4細胞Fas的表達下降。當Fas水平下調至低于Fas/FasL途徑誘導凋亡的閾值時，凋亡受到抑制，從而導致腫瘤細胞逃避機體免疫系統監視，在體內無限增殖。熒光定量PCR技術檢測結果顯示，PUVA上調Fas基因的表達，經PUVA作用后，HL-60細胞Fas基因表達拷貝數的數量級由對照組的103上升至106，K562細胞Fas基因表達拷貝數的數量級由對照組的104上升至107，NB4細胞Fas基因表達拷貝數的數量級由對照組的105上升至108，均上調了3個數量級。流式細胞儀檢測結果在Fas蛋白質水平上進一步證實上述結果。由此我們認為，PUVA誘導人白血病細胞發生凋亡的作用途徑之一是對Fas/FasL系統的調控，通過上調Fas基因而誘導細胞凋亡。

另外，實驗結果顯示，PSO、UVA及PUVA均有誘導細胞凋亡及上調Fas基因、蛋白表達的作用，但無論從直觀角度還是從統計分析結果上看，PUVA的作用要顯著強于前兩者，再一次證明PSO光敏活性的同時，也反映出中藥成分PSO的光敏活性在PUVA對白血病治療作用中的重要性。

【參考文獻】

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[2] 吳少華，張仲海，趙建斌.補骨脂素體內外抗癌活性的實驗研究[J].中國中藥雜志，1998，23(5)：303－305.

[3] Garneiro LV， Ferreira SR， Chen CL， et al. Psoralen derivatives and longwave ultraviolet irradiation are active in vitro against human melanoma cell line[J]. J Photochem Photobiol B，2004， 76(1/3)：49－53.

[4] Plumas J，Drillat P，Jacob MC，et al.Extracorporeal photochemotherapy for treatment of clonal T cell proliferations[J]. Bull Cancer， 2003，90(8/9)：63－70.

對標學習計劃范文第4篇

doi:10.3969/j.issn.1672-9676.2014.07.055

兒童急性B淋巴細胞白血病（B-ALL）在兒童白血病中發病率較高，B-ALL在兒童急性淋巴細胞白血病(ALL)中占80%～85%［1］，臨床預后比其他急性白血病較好。但在B-ALL中有一種變異高表達CD13的急性白血病，我們稱之為B淋巴細胞白血病變異表達CD13，這種疾病臨床預后較差，化療時副作用大，并發癥嚴重，因此，采取合適的護理對策，不但可減輕患兒的痛苦，還能達到滿意的化療效果。近年來我科共收治13例兒童急性B淋巴細胞白血病變異表達CD13的患兒，現將護理體會報道如下。

1 臨床資料

選擇2007年5月~2012年5月我院收治的13例患兒，其中男8例，女5例。年齡1~5歲4例，6~12歲9例。均通過骨髓穿刺確診為兒童急性B淋巴細胞白血病變異表達CD13。其主要診斷依據為符合急性B淋巴細胞白血病免疫表型且具有典型異常高表達髓系標志CD13的特點，在流式細胞技術檢驗中主要表達的抗體有CD19,CD34,CD38,HLA-DR,CD20,CD22,TdT及CD13，其形態學特點有細胞胞體大小不等，染色質疏松，核仁明顯1~2個，胞質多數不整齊，邊緣易見突出，部分漿中有可疑細小顆粒。本組13例患兒中對初治的4例采用環磷酰胺+長春新堿+柔紅霉素+潑尼松+左旋門冬酰胺酶（CODPL）方案，雖然并發癥較少但臨床緩解率較低，預后較差，化療效果不滿意；后治的9例患兒改用CODPL加小劑量阿糖胞苷治療，臨床緩解率比采用CODPL方案較高，但缺點是化療周期長，化療副作用大，并發癥嚴重，其中并發支氣管肺炎4例，重度感染2例，消化道出血1例，口腔潰瘍1例，化療藥靜脈炎1例。

2 護 理

2.1 心理疏導及干預 白血病的治療是一個很長的過程，目前國內治療的療程要求達到5年。在這漫長的過程中，有效穩定患兒及家長的情緒,使其自覺接受治療是保證醫療效果的關鍵，還可起到藥物所不能達到的作用。對于6歲左右的幼小患兒，因本身的知識所限，其負性情緒如焦慮等反應就較少，這類患兒要盡量讓家長陪伴,提供有趣的書籍和玩具等,分散其對穿刺所致的疼痛、化療所致各種反應的注意力，還應更多地關注家長的心理變化并進行心理指導［2］，因為家長的情緒變化與患兒的心理和治療效果呈直接關系，要讓家長樹立信心，積極配和治療，并告之化療是治療白血病的重要手段，讓家長了解所用的化療藥物、劑量、副作用及可能出現的不良反應（如合并感染、出血、 血尿、脫發等），并講解定期化驗（血象，骨髓、肝、腎功能，腦脊液等）的必要性，以及患兒所處的治療階段。對于11歲左右的患兒，雖然對白血病的危害性還未感到恐懼,但卻很容易受住院治療、化療藥物所致胃腸道反應及脫發后自我形象改變等因素的影響，所以我們要告訴患兒及其家長,脫發只是暫時現象,待化療結束后,頭發會慢慢長出來［3］。我們通過以上一系列的心理護理措施，13例患兒全部積極接受治療，保證了治療方案的有效進行。

2.2 感染的觀察與護理 急性白血病患兒本來自身抵抗力低,再加上使用化療藥物,白細胞總數及中性粒細胞數就會明顯降低,當粒細胞<0.5×109/L時，感染的發生率增高，而粒細胞<0.1×109/L時，敗血癥及其他嚴重感染更易出現。本組患兒中有8例存在不同程度的發熱,4例支氣管肺炎,2例重度感染,1例口腔潰瘍,以上感染的患兒除應用廣譜抗生素外,重度感染的患兒還加用了萬古霉素聯合治療，萬古霉素雖抗菌力強但毒副作用也大，使用時注意嚴格控制滴速在1 h以上，嚴密觀察有無血尿等腎毒性表現，定期監測聽力，發現耳鳴、眩暈等癥狀及時處理。護理時要嚴格執行消毒隔離制度,保證護理人員的手衛生，病室空氣流通,地面及床頭桌椅均用84消毒液擦拭,做好保護性隔離。對于高熱患兒要進行體溫監測，給予適當的降溫處理，多飲水,保證水分的攝入。對于合并支氣管肺炎患兒可霧化吸入生理鹽水+鹽酸氨溴索，進行消炎、鎮咳、祛痰等對癥治療。對于發生口腔潰瘍的患兒我們用生理鹽水棉球做口腔護理，每天2～3次，在潰瘍面涂冰硼散，每天3～4次，漱口液可選用碳酸氫鈉與呋喃西林漱口液交替漱口，如疼痛嚴重，可用1%普魯卡因2 ml+慶大霉素8萬U+地塞米松2 mg+生理鹽水100 ml溶液含漱，以減輕疼痛［4］。皮膚護理時要注意大小便后及時清潔會陰處及肛周皮膚以防感染。以上感染病例均得到有效控制，臨床癥狀消失。

2.3 出血的預防及護理 要密切觀察患兒口腔、鼻腔、皮膚黏膜、顱內及胃腸道有無出血現象。定期監測血常規，一般2~3 d 檢測1次，如血小板低于80×109/L，容易出現出血傾向，此時要絕對臥床休息，禁止溫水擦浴、熱敷，注意觀察皮膚及黏膜有無出血點。做各項護理操作時應嚴格執行無菌技術，穿刺要準確無誤，注射治療后要延長穿刺點按壓時間，一般在5 min以上。發熱的患兒應用藥物退熱時，要避免使用復方氨 基 比林、水 楊 酸 類 藥 物，以免加重出血。顱內出血是白血病患者常見的死亡原因之一，應注意觀察患兒意識、瞳孔及生命體征的變化，若患兒突然出現視力模糊、頭暈、頭痛、呼吸急促、噴射性嘔吐，甚至昏迷，則提示有顱內出血的可能，應及時配合醫師搶救。本組有1例下消化道出血患兒，經給予清淡、高熱量、易消化飲食，嚴禁辛辣、堅硬及過熱的食物，并配合應用止血藥物，出血3 d后停止。

2.4 化療藥物應用時的靜脈護理 有些化療藥物，如長春新堿、阿霉素、柔紅霉素等對皮膚刺激性較大，多次注射或藥液滲漏都會引起靜脈周圍組織炎癥或壞死，所以應用時要注意：（1）血管的選擇，要盡量有計劃從遠心端向近心端穿刺，并要求護理人員掌握熟練的靜脈穿刺技巧，避免反復穿刺血管。若藥物劑量過大，刺激性過強，應首先選擇雙上肢粗直的血管注射。每次應更換注射部位，若需要長期注射化療藥物，最好使用PICC置管或靜脈港［5］。（2）靜脈注射前應先用生理鹽水沖洗，確定針頭在靜脈內方可注入藥物；靜脈注射時要邊抽回血邊注藥；藥物輸注完畢后再用生理鹽水10～20 ml沖洗后方可拔出針頭［6］，拔針后局部按壓數分鐘，以防藥物外滲或發生血腫。（3）輸注時疑有或已經發生化療藥物外滲，立即停止注入，不宜立即拔針，應由原部位抽取3～5 ml血液以除去部分藥液，拔除注射針，局部冷敷后再用25%硫酸鎂濕敷，也可用普魯卡因局部封閉。（4）本組中有1例已發生靜脈炎的患兒，我們采用患肢抬高制動，礬冰液濕敷，紫外線燈照射，每日1次，每次30 min，28 d后癥狀基本消失。

3 小 結

綜上所述，兒童急性B淋巴細胞白血病變異表達CD13的患兒在做化療時，副作用和并發癥雖然比其他白血病化療時重，但只要我們通過提前預防、注意觀察、積極處理等一系列護理措施，患兒的痛苦就會降低到最小化，從而達到滿意的化療效果。

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對標學習計劃范文第5篇

目的 研究高糖對肝星狀細胞T6(HSCsT6)增殖及對轉化生長因子β1(TGFβ1)、血小板衍化生長因子(PDGF)及Ⅲ型前膠原(PCⅢ)表達的影響。方法 設不同葡萄糖濃度組，觀察30min～16h時間段，各組對HSCsT6分化、增殖的影響；并用免疫組織化學方法及放射免疫分析法在48、72h后測胞漿內TGFβ1、PDGF及細胞上清液中PCⅢ的表達。結果 在2～16h，1500～6000mg/L濃度葡萄糖對HSCsT6增殖具有時間依賴性，而在4500～6000mg/L濃度組更顯著；同時在4500～6000mg/L濃度組，培養48h后胞漿中TGFβ1和PDGF表達較對照組和高滲對照組明顯增加；培養72h后，細胞上清液中PCⅢ表達較對照組和高滲對照組明顯增加。結論 高血糖可能通過刺激HSCsT6分泌TGFβ1、PDGF及PCⅢ促進肝纖維化。

【關鍵詞】 肝星狀細胞；轉化生長因子；血小板衍化生長因子；Ⅲ型前膠原

ABSTRACT: Objective To investigate the effects of high glucose on the proliferation of hepatic stellate cellT6 (HSCT6) and the expressions of transformation growth factorβ1 (TGFβ1)， plateletderived growth factor (PDGF) and precollagen Ⅲ (PCⅢ). Methods Based on glucose groups of different concentration， we observed the proliferation of HSC in 30min-16h time period， and used the methods of immunohistochemistry and radioimmunoassay to measure the expressions of TGFβ1， PDGF and PCⅢ in the supernatant at 48h and 72h. Results In 2-16h time period， the proliferation of HSC was increased stepwise over time in 1500-6000mg/L group， and was more visible in 4500-6000mg/L group. The expressions of TGFβ1 and PDGF increased at 48h， and the expression of PCⅢ in the supernatant increased at 72h in 4500-6000mg/L group compared with that in glucose control and hypertonic control groups. Conclusion High glucose can promote hepatic fibrosis by stimulating the expressions of TGFβ1， PDGF and PCⅢ in HSCT6.

KEY WORDS: hepatic stellate cell (HSC); transformation growth factor (TGF); plateletderived growth factor (PDGF); precollagen Ⅲ (PCⅢ)

肝硬化可由多種病因引起，非酒精性脂肪肝是其常見原因之一，而糖尿病(diabetes mellitus， DM)則被認為是非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease， NAFLD)的重要危險因素。臨床研究表明，高血糖在NAFLD患者肝纖維化形成中起促進作用[12]。已證實高血糖能夠誘導肝星狀細胞(hepatic stellate cells， HSCs)中Ⅰ型膠原mRNA的表達，并誘導HSCs增殖[3]；其誘導HSCs活化、增殖可能通過依賴轉化生長因子(transformation growth factorβ， TGFβ)機制[4]、TGFβ激活p38有絲分裂原蛋白激酶通路起作用[5]；在糖尿病時，葡萄糖可通過增加細胞內血小板衍化生長因子(plateletderived growth factor， PDGF)的敏感性引起TGFβ1翻譯水平升高[6]；Ⅲ型前膠原(precollagen Ⅲ， PCⅢ)在肝臟主要由肝星狀細胞合成，其與肝纖維化形成活動程度密切相關。本試驗運用不同濃度的葡萄糖刺激體外培養的HSCsT6，運用MTT方法檢測HSCsT6的分化、增殖；并探討高糖對HSCsT6產生TGFβ1、PDGF及PCⅢ的影響，進一步研究高糖在肝纖維化形成中的作用及其機制，以發現肝纖維化形成的新病因。

1 材料與方法

1.1 材料

肝星狀細胞(HSCs)采用大鼠HSCsT6細胞株，由上海第二軍醫大學張俊平教授饋贈；MTT購自美國Sigma公司；多聚賴氨酸購自美國Sigma公司；兔抗大鼠TGFβ1抗體及兔抗大鼠PDGFBB抗體購自北京中杉生物工程有限公司；PCⅢ放免試劑盒購自北京401研究所。

1.2 試驗分組

A組(對照組)：葡萄糖1000mg/L劑量組；B組：葡萄糖1500mg/L劑量組；C組：葡萄糖3000mg/L劑量組；D組：葡萄糖4500mg/L劑量組；E組：葡萄糖6000mg/L劑量組；F組(高滲對照組)：甘露醇6000mg/L劑量組。

1.3 試驗方法

1.3.1 細胞復蘇及培養

將凍存于液氮中的 HSC 取出迅速置37℃水浴解凍后移至超凈臺中，用移液管將細胞懸液移入離心管加入10倍以上普通DMEM(葡萄糖1000g/L)，1000r/min離心5min，除去上清液，加DMEM 5mL，將細胞吹打為混懸液并移至無菌培養瓶中置于5mL/L CO2細胞培養箱中培養至細胞貼壁。

1.3.2 MTT法檢測細胞的增殖率

HSCs細胞貼壁長至單層90%～95%時，2.5g/L胰蛋白酶消化，以普通的DMEM(含100mL/L小牛血清、100IU/mL青霉素、100IU/mL鏈霉素及葡萄糖1000mg/L的培養液)調整細胞為1×105個/mL密度接種于96孔培養板，待HSCs細胞貼壁長至單層70%～80%時，換無血清的DMEM同步化細胞，每孔100μL繼續培養24h。分別于培養結束前30min、1、2、4、8、16h加入A液、B液、C液、D液、E液和F液，同時設空白對照組，每組設6個復孔，試驗重復3次。培養24h后，每孔加入MTT 20μL，37℃繼續培養4h。終止培養后棄上清，每孔加入150μL DMSO溶解振蕩，待結晶物充分溶解后(溶液呈藍紫色)，置酶標儀上檢測各孔吸光度值(表1)。

1.3.3 干預及細胞上清液的收集

將含普通的DMEM調整細胞為1×105個/mL密度接種于6孔培養板，待細胞貼壁后，將培養板中DMEM培養液倒出，換用A液、B液、C液、D液、E液和F液培養72h后，收集 HSC 培養上清液于EP管中-20℃凍存待檢。后將收集的PCⅢ各組細胞上清液送同位素室，采用放射免疫分析法檢測。所有檢測均由專業技術人員嚴格按操作規程執行。

1.3.4 細胞免疫化學染色

將HSCs懸液按2×105個/mL密度傳代于6孔板內，使細胞混懸液覆蓋蓋玻片，換用A液、B液、C液、D液、E液和F液，每小孔中2mL，每組設3個小孔，培養48h后，當細胞出現明顯形態變化，細胞貼壁于蓋玻片生長至90%左右，停止干預用冷PBS輕柔沖洗細胞爬片3次，50g/L多聚甲醛固定30min，固定后的細胞爬片經內源性過氧化物酶滅活、抗原修復、羊血清非特異位點封閉后，分別加入兔抗大鼠TGFβ1及PDGF抗體孵育2h，再依次加入二抗試劑液孵育，后進行脫水、封片，鏡下觀察。采用HPIAS2000型多媒體彩色圖像分析系統對染色陽性部位進行平均灰度值(average gray scale values， AGSV)的測定。

1.4 統計學處理

采用SPSS14.0統計軟件，進行多組間比較，數據以均數±標準差(±s)表示，采用Oneway ANOVA和LSDt檢驗，α=0.05。

2 結 果

2.1 高糖對HSCs細胞增殖的影響

MTT法檢測HSCs細胞增殖率結果表明：甘露醇組在30min～8h作用時間對HSCs增殖無明顯影響；與各濃度組空白對照相比較：葡萄糖濃度≤3000mg/L時，在8～16h作用時間呈時間依賴性地刺激HSCs增殖，而在30min～4h作用時間對HSCs增殖無明顯影響；而當葡萄糖濃度≥4500mg/L時，在2～16h作用時間呈時間依賴性地刺激HSCs增殖，而在30min～1h作用時間對HSCs增殖無明顯影響(表1)。表1 不同濃度的葡萄糖對HSCs增殖的影響（略）

2.2 免疫組織化學方法檢測各濃度組HSCs對TGFβ1和PDGF的表達

D組、E組分別與A及F組相比較，TGFβ1、PDGF的表達均升高，具有統計學意義(表2、圖1、圖2)。表2 HSCs產生的TGFβ1和PDGFBB免疫化學分析平均吸光度值（略）

2.3 放射免疫方法檢測各組細胞上清液中PCⅢ的表達

將收集的各組細胞上清液采用放射免疫分析法檢測PCⅢ的表達，結果顯示D組(488.35±61.60)、E組(499.53±79.76)PCⅢ的表達較A組(288.05±0.68)、F組(311.79±38.20)均增高，具有統計學意義(P均

3 討 論

目前，對DM的腎臟、神經、血管等病變的研究較多，肝臟病變研究較少，其發病機制是否相似尚不清楚。HSCs是肝臟細胞外基質的主要來源，其活化是肝纖維化形成的關鍵。活化的HSCs可以合成和分泌多種膠原酶和少量的ECM，釋放多種細胞因子[7]參與肝臟的物質代謝。TGFβ是迄今發現的最強的肝纖維化促進劑[8]，可促進ECM的表達[910]，抑制基質金屬蛋白酶的合成，還能刺激肝星狀細胞產生血小板衍化生長因子(PDGF)。PDGF是肝星狀細胞的強有絲分裂原[11]，能促使肝星狀細胞增殖、移行，誘導合成TGFβ1[12]。并且TGFβ1可引起細胞自分泌，加強細胞合成膠原，而大量產生的細胞外基質使肝纖維化過程不斷加重，因此，TGFβ1可使肝星狀細胞的激活處于一種正反饋的不斷加強中[13]。研究表明，高糖可促進TGFβ的表達[14]，并且糖尿病患者體內TGFβ的表達是增加的[15]。PDGF主要由肝內枯否細胞和HSC產生，其中PDGFBB在刺激HSCs生長和相關細胞間信號傳遞方面更為重要[16]。PDGF對HSC的活化、分裂、增殖有明顯的促進作用，且誘導HSCs合成TGF、胰島素樣生長因子(insulin like growth factor， IGF)等細胞因子。活化的HSCs分泌活性PDGF，又進一步刺激HSC活化，形成了PDGF自分泌循環。已證實，高糖環境能促進PDGF及其受體的表達[17]。高血糖能夠誘導HSCs中Ⅰ型膠原mRNA的表達以及HSCs增殖；其誘導HSCs活化、增殖及膠原分泌可能通過依賴TGFβ機制、TGFβ激活p38有絲分裂原蛋白激酶通路起作用；TGFβ1可誘導HSC釋放的CTGF高表達，后者能促進HSC對Ⅰ、Ⅲ型膠原、LN、金屬蛋白酶抑制劑(tissue inhibitor of metalloproteinases， TIMPs)和TGFβ1的高表達而促進了纖維化的形成。

本實驗通過不同濃度的葡萄糖刺激體外培養HSCsT6，結果顯示：在2～16h，1500～6000mg/L濃度葡萄糖對HSCsT6分化、增殖具有時間依賴性，在4500～6000mg/L濃度更顯著。這表明在短期內高糖能夠刺激HSCsT6分化、增殖，且增殖程度與葡萄糖作用時間呈正相關；HSCsT6在高糖環境中培養48h后，高濃度組(4500～6000mg/L)胞漿中TGFβ1和PDGF表達較對照組和高滲對照組明顯增加；其在高糖環境中培養72h后，高濃度組(4500～6000mg/L)細胞上清液中PCⅢ表達較對照組和高滲對照組明顯增加。表明HSCsT6分泌TGFβ1、PDGF及PCⅢ的量與葡萄糖濃度呈正相關，并能在短時間內發揮作用。考慮高血糖作為糖尿病的重要表現可能通過刺激HSC活化并大量分泌TGFβ1、PDGF及PCⅢ從而促進肝纖維化的形成。同時為排除高滲狀態對HSCsT6分泌膠原、細胞因子產生的影響，另設立甘露醇組作為高滲對照組，通過比較發現HSCsT6分泌膠原、細胞因子量的增加與干預液的滲透壓無關。

本實驗雖初步證實了高糖有致肝纖維化的作用，但仍有待于進一步從分子水平，通過研究細胞內信號轉導通路等途徑，來證實這一理論，使研究進入一個較深的層次。

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